呼吸道合胞病毒型PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法
呼吸道合胞病毒型PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法：?
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積yibing醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%yi醇(75%yi醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒
小鼠脂氧素A4(LXA4)ELISA試劑盒
小鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒
小鼠脂聯(lián)素(Acrp30)ELISA試劑盒
小鼠脂肪酸合成酶(FASN)ELISA試劑盒
小鼠脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒
小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒
小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒
小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA試劑盒
小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒
小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA試劑盒
小鼠整合素αM(Itgam/CD11b)ELISA試劑盒
小鼠整合素α-IIb(Itga2b/CD41)ELISA試劑盒
小鼠整合素α5(Itgax/CD11c)ELISA試劑盒
小鼠長停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)ELISA試劑盒
小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒
上一篇 葉綠體Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差的原因 下一篇 馬爾太蟲通用PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)的特異性決定因素
會(huì)員_a.png)