公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胚腎細(xì)胞；293Cells,lowpassage | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63493 |
細(xì)胞名稱(chēng) 胚腎細(xì)胞；293Cells,lowpassage
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 293細(xì)胞是胚胎腎細(xì)胞用剪切過(guò)的腺病毒5DNA轉(zhuǎn)化得到，它們包含并表達(dá)腺病毒5的早期區(qū)段1，包含并表達(dá)腺病毒5的早期區(qū)段1，能互補(bǔ)E1失活的腺病毒突變株和載體，使其生長(zhǎng)；在DNA轉(zhuǎn)染檢測(cè)中它們是特別有效的受體細(xì)胞；對(duì)于大多數(shù)即使不是全部人腺病毒的生長(zhǎng)和溶菌斑測(cè)試，它們也表現(xiàn)很好。這些細(xì)胞廣泛應(yīng)用于因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體的繁殖與滴定；因此它們被用來(lái)構(gòu)建腺病毒載體，用于構(gòu)建腺病毒載體使用低代數(shù)細(xì)胞，一般不超過(guò)40代，對(duì)于保持這株細(xì)胞的優(yōu)良特性，正確的細(xì)胞培養(yǎng)方法十分重要。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
傳代情況: P(27+5)
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
?
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
rmIL-12 p40 Homodimer, CF (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBG19-4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 p40 Homodimer (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB10.2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 (50 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBG3-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 (10 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBG10-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11, CF (5 UG)細(xì)胞名交瘤細(xì)胞系；HybridLivercellGLH04 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11, CF (25 UG)細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系；HybridLivercellGLH03 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 Ra/Fc, CF (200 UG)細(xì)交瘤細(xì)胞系；HybridLivercellGLH02 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 Ra/Fc (200 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBNI8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 (5 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBPE9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-11 (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBBrE-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10, CF (5 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；UK1-3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10, CF (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FIB2-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 Ra, CF (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；UK1-87 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 Ra (25 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系；TPA1-41 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 (Cys149Tyr), CF (10 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBPG11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-10 (Cys149Tyr) (10 UG)細(xì)胞名稱(chēng): 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞；FIB1-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
胚腎細(xì)胞；293Cells,lowpassage人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)ELISA試劑盒NGFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人纖調(diào)蛋白(fibromodulin)ELISA試劑盒NHE3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒NKBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒NLRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒N-MID-OTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒NMP-22ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)ELISA試劑盒NNEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒NN-T4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
點(diǎn)擊放大
會(huì)員_a.png)